• Título:  DESARROLLO DE DOS CEPAS ATENUADAS DE SALMONELLA ENTERICA SEROVAR CHOLERAESUIS COMO VEHÍCULOS PARA VACUNAS DE ADN Y EXPRESIÓN DE UN ANTÍGENO MODELO.
• Autor:  BARTOLOME AYARZA, ALMIRA
• Universidad:  Universidad Complutense de Madrid
• Departamento:  Sanidad animal
• Fecha de Lectura:  11/02/2011
• Programa de doctorado:  CIENCIAS VETERINARIAS
• Dirección: 
  • DOMINGUEZ BERNAL, GUSTAVO RAMON (DIRECTOR)
• Tribunal: 
  • ORDEN GUTIÉRREZ, JOSÉ ANTONIO (PRESIDENTE)
  • CARRIÓN HERRERO, FRANCISCO JAVIER (SECRETARIO)
  • CARVAJAL URUEÑA, ANA MARÍA (VOCAL)
  • Ramos Morales, Francisco (VOCAL)
  • TIERREZ MARTÍNEZ, ALBERTO (VOCAL)
• Descriptores: 
  • CIENCIAS AGRARIAS
• Localización:  E-PRINTS COMPLUTENSE
• https://eprints.ucm.es/id/eprint/14505/
• Resumen:
  En el campo de la sanidad animal, la estrategia más rentable y segura en la profilaxis de las enfermedades infecciosas es el empleo de vacunas, especialmente debido al uso masivo de antibióticos que se ha realizado con anterioridad y, que ha sido el responsable en gran medida, de la diseminación de genes de resistencia entre los microorganismos patógenos. Una de las estrategias más económicas y eficaces para desarrollar estas vacunas es el uso de cepas vacunales vivas atenuadas. Estas cepas pre sentan como ventaja añadida la posibilidad de ser utilizadas como vehículos vacunales, o bien para liberar vacunas de DNA (bactofección) o para expresar antígenos heterólogos. Con estos antecedentes, hemos construído dos cepas vivas atenuadas a part ir de Salmonella enterica serovar Choleraesuis mediante la deleción, utilizando el sistema ?Red recombinasa, de dos reguladores fundamentales de la virulencia, el sistema PhoP/PhoQ y RpoS. Los mutantes obtenidos, demuestran ser similares fenotípicame nte a la cepa parental y, atenuados en el modelo murino y porcino de infección experimental. Para evaluar el comportamiento de nuestras cepas al entrar en contacto con las células del hospedador, realizamos un experimento de infección de cultivos pr imarios con fibroblastos y macrófagos procedentes de lámina propia intestinal de cerdo, células fundamentales en la vía de entada del patógeno. De manera muy interesante, observamos como los mutantes construídos presentan un fenotipo de persistencia en macrófagos viables y de proliferación en fibroblastos viables en comparación con la cepa parental y, otro mutante atenuado presente en el mercado como vacuna comercial (SC-54). Una vez que observamos que nuestras cepas son atenuadas y que, ademá s, muestran un fenotipo de persistencia y proliferación en cultivos celulares normalmente no permisivos para S. Choleraesuis, podemos considerar que nuestros mutantes, ?phoP/Q y ?rpoS son excelentes candidatos para desarrollar vehículos vacunales ada ptados al cerdo como hospedador. A partir de este momento, hemos optimizado nuestros vehículos vacunales con el fin de medir su capacidad para producir una respuesta inmune específica frente al antígeno modelo 3XFLAG: 1. Hemos utilizado ?phoP/Q y ? rpoS como vehículos para vacunas de DNA mediante la incorporación, por electroporación, del plásmido de expresión eucariota pcmv3XFLAGm2A. Observando una respuesta inmune sistémica específica frente a 3XFLAG con ambos mutantes, una respuesta mucosal