• Título:  DESARROLLO DE NUEVAS METODOLOGIAS PARA LA ENUMERACIÓN DE CÉLULAS EN CULTIVO Y LA CUANTIFICACIÓN DE LA APOPTOSIS
• Autor:  DÍAZ MARTÍN, DAVID
• Universidad:  Universidad de Alcalá
• Departamento:  Medicina
• Fecha de Lectura:  12/12/2006
• Programa de doctorado:  MEDICINA
• Dirección: 
  • Álvarez de Mon Soto, Melchor (DIRECTOR)
  • MONSERRAT SANZ, JORGE (CODIRECTOR)
  • PRIETO MARTIN, ALFREDO (CODIRECTOR)
• Tribunal: 
  • BUJAN VARELA, MARIA JULIA ARACELI (PRESIDENTE)
  • REYES MARTIN, EDUARDO (SECRETARIO)
  • DE LA HERA MARTÍNEZ, ANTONIO (VOCAL)
  • ORFAO DE MATOS CORREIA E VALE, JOSE ALBERTO (VOCAL)
  • Girón González, José Antonio (VOCAL)
• Descriptores: 
  • ANTIGENOS
  • CULTIVO CELULAR
• Resumen:
  Antecedentes: Los estándares internos han sido utilizados en métodos de citometría de fuljo para enumerar subpoblaciones linfoides y progenitores hematopoieticos ex vivo. Sin embargo, los métodos actualmente disponibles no pueden ser realmente aplicados al análisis de células cultivadas debido a la existencia de muerte celular durante ensayos, in vitro. Materiales y Métodos: Esta tesis propone un nuevo método para la enumeración de células viables y no viables y de células proliferantes y no proliferantes en cultivo. Las células fueron cuantificadas mediante un estándar interno de referencia de micropartículas y la discriminación entre células viables y no viables se realizó mediante el marcaje doble con anexina V y 7- aminoactinomicina que permite el marcaje doble de antígenos de superficie. .Resultados: El método es más preciso, exacto y sensible que la microscopía óptica convencional y los contadores celulares automáticos. Además, puede ser utilizado para medir exactamente el numero de células apoptóticas en un cultivo celular heterogéneo. Conclusiones: El método de enumeración celular ratiométrico por citometría de flujo desarrollado en esta tesis es más exacto, preciso y sensible que la microscopia óptica convencional y los contadores celulares automáticos y permite la definición del inmunofenotipo de las poblaciones celulares en un cultivocelular heterogéneo.