• Título:  OBTENCIÓN, CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE LA TOXINA DE ECHIICHTHYS VIPERA EN ESCHERICHIA COLI, PICHIA PASTORIS Y NICOTIANA TABACUM CON LA RUTA DE GLICOSILACIÓN ¿HUMANIZADA¿
• Autor:  Rodríguez Rama, Jose Luis
• Universidad:  Universidad de Santiago de Compostela
• Departamento:  Escuela de Doctorado Internacional (EDIUS)
• Fecha de Lectura:  22/04/2022
• Programa de doctorado:  Programa de Doctorado en Avances en Biología Microbiana y Parasitaria por la Universidad de Santiago de Compostela
• Dirección: 
  • GONZÁLEZ VILLA, TOMÁS (DIRECTOR)
  • MIGUEL BOUZAS, TRINIDAD DE (CODIRECTOR)
• Tribunal: 
  • Rodríguez Osorio, Carlos (PRESIDENTE)
  • Blanco Camba, Pilar (SECRETARIO)
  • SACRISTÁN PÉREZ-MINAYO, GONZALO (VOCAL)
• Descriptores: 
  • INGENIERIA GENETICA
  • BIOLOGIA MOLECULAR DE MICROORGANISMOS
  • BIOLOGIA MOLECULAR DE PLANTAS
• Localización:  BIBLIOTECA XERAL USC
• 630459_1434480.pdf
• Resumen:
  En el transcurso de la evolución los animales venenosos han producido una serie de toxinas peptídicas destinadas a actuar como armas de defensa contra los depredadores o para la captura de presas. Las dianas de estas toxinas son en muchos casos proteínas, afectando así a canales iónicos, receptores y transportadores de membrana. Estas toxinas de origen animal se conocen como zootoxinas y constituyen una fuente inestimable de agentes farmacológicos muy específicos, empleados por ejemplo en la caracterización de subtipos de canales iónicos y de receptores de membrana. Por su eficacia y selectividad de acción ofrecen un potencial terapéutico importante y muchas toxinas se encuentran en la actualidad en fase de experimentación, estudios clínicos o incluso aprobadas para diferentes tratamientos. Los venenos de peces afectan a la actividad cardiovascular y neuromuscular de los vertebrados, produciendo asimismo edemas y destrucción de tejidos. Estos venenos presentan toxinas con niveles de actividad similar a los observados en los de serpientes y en general muestran una alta actividad citolítica. Aunque la composición del veneno de peces es compleja, presentando diversas sustancias son las toxinas presentes en el veneno las que tienen la capacidad de crear poros e inducir la despolarización de las membranas celulares, lo que suele conducir a la muerte y lisis celular. Se cree que el número de toxinas individuales activas en el veneno de peces es reducido detectándose habitualmente unas pocas fracciones proteicas. Muchas toxinas son principalmente canales iónicos de membrana glicosilados y no glicosilados de elevado peso molecular que están relacionados de una u otra forma con control del Ca++ el Na+ o el K+. El presente estudio se centra en el análisis y caracterización de la toxina de mayor peso molecular de la especie Echiichthys vipera, que corresponde a una fracción proteica de 340.000Da. Esta fracción proteica ha recibido el nombre de Traquinina (¿Trachinina¿) y ha sido descrita anteriormente como una proteína tetramérica de 324.000Da, compuesta por cuatro subunidades idénticas de 81.000Da capaz de producir la muerte por inyección intravenosa a ratones DL100 de 100ug/kg. Se aborda así la búsqueda y caracterización de la toxina presente en el veneno de E. vipera, persiguiendo obtener su secuencia codificante y producirla de forma heteróloga en tres organismos comúnmente utilizados para este fin: E. coli, P. pastoris y N. tabacum. Simultáneamente se desarrollaron plantas de N. tabacum con su ruta de glicosilación modificada, con el fin de que produzcan glicanos parcialmente humanizados. Esta tarea se enfocó a la generación de construcciones capaces de silenciar o reducir la expresión de los genes ß1,2-xylosyltransferasa y ¿1,3-fucosyltransferasa, empleando para ello sistemas de ARN interferentes (ARNi), tanto de cadena corta (ARNsh) como larga (ARNil), así como la inserción del gen ß1,4-galactosiltransferasa humano para la producción de proteínas con potencial interés de uso en humanos, como podría ser la toxina de E. vipera.